清開靈膠囊由金銀花、板藍根、梔子、水牛角、膽酸等組成,具有清熱解毒功效,主治上呼吸道感染、病毒性感染、高熱等症。梔子苷為梔子的主要有效成分之一,清開靈膠囊的質量標準目前未收載梔子苷含量測定方法,為了更好控制藥品質量,我們採用高效液相色譜(HPLC)法測定該製劑中的梔子苷含量,實驗結果表明,該方法分離度高、重複性好,獲得了滿意的結果。
1、儀器與試藥
Agilent 1100型HPLC儀,Rev.B.02.01 SR1色譜工作站,Gracesmart C18色譜柱(250 mm×4.0 mm,5 μm)；超聲波處理儀MUS/1006。梔子苷對照品(中國藥品生物製品檢定所提供,批號110749-200613)；清開靈膠囊樣品(廣州白雲山明興製藥有限公司,批號Mk2901、Mk2902、Mk2903)。乙腈、甲醇為色譜純。
2、方法與結果
2.1 色譜條件
色譜柱為Gracesmart C18(250 mm×4.0 mm,5 μm),流動相為乙腈-水(15∶85),檢測波長為238 nm,流速為1.0 mL/min,進樣量10 μL[1]。
2.2 供試溶液的製備
2.2.1 對照品溶液的製備
精密稱取梔子苷對照品15.1 mg,置50 mL棕色量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,精密量取5 mL,置100 mL量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,製成每1 mL含15.1 μg的`溶液,即得。
2.2.2 供試品溶液的製備
取本品10粒,除去膠囊殼,內容物精密稱定,研細,取粉末0.25 g,精密稱定,置25 mL量瓶中,加甲醇20 mL,超聲處理(功率300 W,頻率33 kHz)30 min,放冷,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,微孔濾膜(0.45 μm)濾過,即得。
2.2.3 陰性樣品溶液的製備
按處方組成,取除梔子外的其餘藥味,按工藝要求製成不含梔子苷的清開靈膠囊,再按供試品溶液的製備方法操作,得陰性樣品溶液。
2.3 空白試驗
按上述儀器和實驗條件,取Mk2901批供試品溶液、陰性樣品溶液、梔子苷對照品溶液分別注入液相色譜儀,測定。結果供試品色譜圖中,呈現與對照品保留時間相同的色譜峯,且基線平穩,分離度好,陰性樣品在此保留時間無色譜峯。
2.4 線性關係
分別精密吸取濃度為0.302 mg/mL對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL至10 mL容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,分別吸取10 μL注入液相色譜儀,測得峯面積。以峯面積為縱座標,梔子苷對照品進樣量(μg)為橫座標,繪製標準曲線,計算迴歸方程：Y＝1 351.973X－4.454,r＝0.999 8,在0.060 4～0.302 0 μg範圍內,對照品進樣量與峯面積呈良好的線性關係。
2.5 精密度試驗
取Mk2901批供試品溶液,按上述色譜條件重複進樣6次,測定峯面積,計算其RSD＝0.83%。結果表明儀器精密度良好。
2.6 穩定性試驗
取Mk2901批供試品溶液,按上述色譜條件分別於0、2、4、6、8、12 h測定峯面積,計算其RSD＝0.86%。結果表明樣品在10 h內穩定。
2.7 重複性試驗
取本品內容物(批號Mk2901)10 g,混合均勻,精密稱取樣品5份,每份0.25 g。按供試品溶液製備方法制備,依上述測定條件測定,並計算含量,結果平均含量為1.602 4 mg/g,RSD＝1.22%。表明本法重複性好。
2.8 加樣回收率試驗
精密量取重複性試驗項下的樣品0.1 g各5份,分別精密加入濃度為302 μg/mL的梔子苷對照品溶液0.5 mL,按供試品溶液製備方法處理得供試品溶液,按上述色譜條件測定,計算回收率,結果表明此色譜條件測定梔子苷含量回收率良好。見表1。表1 加樣回收率試驗結果（略）
2.9 樣品測定
分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液10 μL,分別注入液相色譜儀,依上法測定,即得。依上述色譜條件測定Mk2901、Mk2902、Mk2903批清開靈膠囊中梔子苷含量,結果見表2。表2 梔子苷含量測定結果(略)
3、討論
梔子苷為環烯醚萜苷類,易溶解於甲醇等溶劑,溶解時採用超聲處理,有利於促進樣品中的梔子苷溶解。梔子苷在238 nm波長處有最大吸收,故選定238 nm作為檢測波長。流動相比較了乙腈-水(15∶85)和乙腈-水(10∶90)系統,梔子苷主峯均可與雜質峯分離,為縮短檢測時間,故選擇乙腈-水(15∶85)為流動相。
本試驗建立的清開靈膠囊中梔子苷含量HPLC測定方法,靈敏度、穩定性及重複性能夠符合含量測定的要求,而且操作簡便,可以作為清開靈膠囊生產中梔子苷含量的測定方法。
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